3.1. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

  • Fíjate, en los pasos que hasta ahora se han dado: con la técnica didesoxi has conseguido determinar la secuencia de un ADN, pero una vez que se obtiene el ADN, es necesario obtener copias del mismo, esto se puede conseguir mediante dos técnicas; una de ellas la acabas de ver, la clonación molecular. La otra técnica se llama a reacción en cadena de la polimerasa o PCR.
  • Este es un método alternativo en el que no se usan células, aunque el objetivo es el mismo: conseguir un gran número de copias de un gen. La PCR imita in vitro, el ciclo de replicación del ADN de una célula antes de dividirse y lo repite entre 20 y 30 veces, obteniéndose así un gran número de copias de cualquier secuencia de ADN.
  • A ver si lo he entendido... primero corta y pega, y luego copiar, copiar, copiar.
  • Sí, algo así.
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La técnica de la reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, ha dado nuevas alas a la ingeniería genética y a toda la biología molecular.
 
Fue inventada por Kary Mullis en 1985. Es una técnica que, basándose en la capacidad de la ADN-polimerasa para replicar el ADN, permite obtener in vitro, en el laboratorio, a partir de un fragmento determinado de ADN un número ilimitado de copias del mismo, en muy poco tiempo.
 
El proceso es muy sencillo, se necesita el fragmento de ADN que se quiere replicar, un tubo de ensayo, una concentración suficiente de los cuatro desoxirribonucleótidos trifosfato que formarán las nuevas réplicas, una fuente de calor, unas pequeñas cadenas de ADN complementarias a los extremos 3' de la secuencia que se desea replicar (que actúan como cebadores o primers), y la ADN polimerasa; se utiliza la ADN polimerasa de una bacteria que vive en aguas termales, Thermus aquaticus, que aguanta temperaturas altas.
 
 



¿Sabes cuánto dura el proceso? Es un proceso cíclico y dura aproximadamente cinco minutos.
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Vas a medir ahora tus conocimientos sobre la técnica de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa).
  1. ¿Cuál es el objetivo de la PCR?
  2. ¿Es necesario la presencia de células?
  3. ¿Qué material se necesita para esta técnica?
  4. ¿Por qué se necesitan diferentes temperaturas en el proceso?
  5. ¿Cuántas copias de obtienen del ADN blanco después de un ciclo?
  6. ¿Y al final del proceso, después de 20 o 25 ciclos?

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¿Que utilidades crees que puede tener la obtención de copias de un fragmento de ADN?
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Aquí tienes una actividad sencilla de repaso sobre las herramientas biotecnlógicas, ¡inténtalo! Relaciona cada uno de los términos que aparecen en la lista siguiente con su definición.

Endonucleasas de restricción, ADN ligasas, ADN polimerasas, ADN recombinante, Vectores de clonación, Vectores de expresión.

. Enzimas bacterianas que cortan ambas cadenas de ADN en puntos específicos.

. Vectores que permiten que el ADN introducido en una célula huésped se transcriba y el ARNm se traduzca.

. Vehículos capaces de introducir un ADN extraño en una célula huésped y de replicarse en ella.

. Enzimas encargadas de sintetizar nuevas cadenas de ADN durante el proceso de replicación.

. Enzimas encargadas de unir fragmentos de ADN y formar una cadena continua.

. Molécula de ADN formada por secuencias de ADN procedentes de distintos organismos.

  

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