2.2. Secuenciación del ADN
Actividad
Otra técnica muy usada en ingeniería genética es la secuenciación del ADN recombinante, que consiste en la determinación de la secuencia de nucleótidos de un ADN concreto.
El método más usado se denomina técnica de terminación de cadena de Sanger, hoy en día perfeccionado y conocido como la técnica del didesoxi.
Pregunta Verdadero-FalsoEsta técnica es como elaborar un puzle, para poder realizarla necesitas de algunas herramientas que ya conoces. Fíjate en las imágenes del vídeo.
¿Puedes decir si son verdaderas las opciones que se te plantean seguidamente?
La técnica didesoxi pretende conseguir muchos fragmentos de una molécula de ADN, de diversos tamaños. Para cortar utiliza enzimas de restricción:
Verdadero Falso
Una vez obtenidos los fragmentos, hay que ordenar y pegar. Para ello, volvemos a utilizar enzimas de restricción:
Verdadero Falso
La técnica de la didesoxi se denomina así ya que utiliza didesoxirribonucleótidos (ddNTP), es decir, nucleótidos sin el grupo alcohol (OH) del carbono 3'.
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| Imagen 14. Elaboración propia |
Si te fijas en la imagen, ambos nucleótidos se diferencian en el carbono que aparece en posición 3‘. El desoxinucleótido tiene, en esta posición, unido un grupo OH. El didesoxinucleótido lo ha perdido y sólo tiene unido un hidrógeno.
Cuando añadimos un nucleótido a una cadena de ADN, éste se unirá por el extremo 3', por el OH; sin embargo, si añadimos un didesoxinucleótido, no se podrá unir, ya que le falta el grupo alcohol.
Pregunta Verdadero-Falso
En esta técnica, para hacer la reacción se necesitan varios elementos: un molde, un cebador, desoxinucleótidos y didesoxinucleotidos. ¿Puedes deducir la función de cada uno de estos componentes?
El molde es una hebra de ADN, sirve, como su nombre indica para fijarse en él y copiarlo de manera complementaria:
Verdadero Falso
El cebador ayuda a crear la nueva cadena de ADN:
Verdadero Falso
Los dexosinucleótidos y didesoxinucleotidos se diferencian en la posición del grupo OH del carbono 5':
Verdadero Falso
Ya sabes necesitamos ADN molde, un cebador, dexosinucleótidos y didesoxinucleotidos. Al añadir la ADN-polimerasa, comienza la unión de los nucleótidos al cebador, pero cesa el incorporarse un didesoxinucleótido.
Se produce un conjunto de cadenas dobles cuyas longitudes dependen de la situación del didesoxinucleótido que se incorpora a continuación se colocan en un autoradiograma (un gel en el que se muestran las bandas y sobre el que puede leerse la secuencia).
Realiza este ejercicio sobre la técnica de didesoxi.
Caso de estudio
En este ejercicio nos muestran un gel de secuenciación por el método del didesoxi.
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| Imagen 17. Autor: Desconocido. Licencia Creative Commons |
¿Puedes obtener la secuencia del ADN?
